制藥企業(yè)的潔凈室往往需要對(duì)環(huán)境微生物進(jìn)行監(jiān)測(cè)，以保證生產(chǎn)環(huán)境的清潔，不造成藥品污染。企業(yè)制藥潔凈室常見(jiàn)污染源如下(根據(jù)中國(guó)美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局研究院在2018年全國(guó)制藥微生物檢驗(yàn)與控制技術(shù)培訓(xùn)班上的講課ppt):
1、人。攜帶的微生物主要有：金葡、表葡、八疊球菌、不動(dòng)桿菌、產(chǎn)堿桿菌、親脂性酵母、皮膚真菌等。
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2、空氣。攜帶的微生物主要有：微球菌屬、芽孢桿菌屬、葡萄球菌屬、棒狀桿菌、曲霉、青霉。
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3、設(shè)備、墻面、地面表面。存留的微生物主要有：假單胞菌、表葡、芽孢桿菌等。
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4、原材料及包裝材料。攜帶的微生物有：乳桿菌、假單胞菌、芽孢桿菌、鏈球菌、梭菌、霉菌（枝孢屬、青霉屬、曲霉屬）。
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5、水。水中的微生物主要有：假單胞菌、產(chǎn)堿桿菌、寡養(yǎng)單胞菌、洋蔥伯克霍爾德菌、皮氏伯克霍爾德菌、甲基桿菌屬、沙雷氏菌、黃桿菌等。
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? ? ? ? 許多企業(yè)為了鑒定菌種，常將大量資金用于微生物全自動(dòng)鑒定儀器和相關(guān)試劑的購(gòu)買(mǎi)。其實(shí)，一些微生物生化鑒定試劑盒（無(wú)須軟件和儀器）、鑒別培養(yǎng)基和PCR試劑盒即可完成常見(jiàn)菌種的鑒定工作。
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? ? ? ? 對(duì)于以上紅色標(biāo)出的菌種或菌屬，已知均可用HiMedia生產(chǎn)的生化鑒定試劑盒去作鑒定。其生化鑒定試劑盒包含有生化鑒定卡及輔助試劑，每個(gè)生化鑒定卡上有12個(gè)孔，預(yù)置相關(guān)的培養(yǎng)基和生化試劑，對(duì)應(yīng)12種生化反應(yīng)。反應(yīng)完成后，通過(guò)試劑盒內(nèi)提供的結(jié)果詮釋表和菌種標(biāo)準(zhǔn)表，即可人工完成菌種鑒定。其試劑盒覆蓋大部分常見(jiàn)菌種，準(zhǔn)確度高，在歐盟和美國(guó)FDA均有產(chǎn)品注冊(cè)。
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? ? ? ? 上面的常見(jiàn)菌群中，金葡、表葡可用葡萄球菌的生化鑒定試劑盒（貨號(hào)KB004）進(jìn)行鑒定，不動(dòng)桿菌、芽孢桿菌、乳桿菌、鏈球菌均有相應(yīng)的生化鑒定試劑盒。假單胞菌、洋蔥伯克霍爾德菌可用非發(fā)酵菌生化鑒定試劑盒（貨號(hào)KB019）進(jìn)行鑒定。沙雷氏菌屬于腸桿菌科，可用腸桿菌科的生化鑒定試劑盒（貨號(hào)KB003）進(jìn)行鑒定。
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? ? ? ? 對(duì)于黃色部分的菌種：寡養(yǎng)單胞菌，又稱(chēng)嗜麥芽窄食單胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)，舊名“嗜麥芽假單胞菌”。它和皮氏伯克霍爾德菌、黃桿菌均可用非發(fā)酵菌試劑盒進(jìn)行鑒定。
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? ? ? ? 對(duì)于藍(lán)色部分的菌種：
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1、微球菌屬。最常見(jiàn)為藤黃微球菌（Micrococcus luteus）。其為革蘭氏陽(yáng)性，與葡萄球菌近似，菌落光滑，顏色呈黃或紅色。為條件致病菌，廣泛存在于自然界。《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)》指出，其接觸酶陽(yáng)性，無(wú)運(yùn)動(dòng)性，可利用乙酸鹽、乳酸鹽和丙酸鹽，不產(chǎn)生吲哚。依據(jù)生化特征鑒別藤黃微球菌時(shí)，主要依據(jù)其在含糖的復(fù)雜培養(yǎng)基上好氧的生長(zhǎng)而不產(chǎn)生可察覺(jué)的酸。其菌落呈黃色、黃綠色或橙色。具體鑒定，可采用如下方案：1）先革蘭氏染色，觀察鏡下形態(tài)，如為球形，革蘭陽(yáng)性，且疑為葡萄球菌或微球菌。2）可采用“葡萄球菌和微球菌發(fā)酵培養(yǎng)基”（英文名Fermentation HiVeg Medium for Staphylococcus and Micrococcus，貨號(hào)#MV827），以區(qū)分微球菌和葡萄球菌。其原理是，培養(yǎng)基中包含葡萄糖，葡萄球菌能厭氧產(chǎn)酸，而微球菌不能。培養(yǎng)基含有的溴甲酚紫為pH指示劑，可指示產(chǎn)酸帶來(lái)的pH變化。該液體培養(yǎng)基含有少量瓊脂，因而創(chuàng)造出厭氧環(huán)境。培養(yǎng)18-24小時(shí)后，如果是藤黃微球菌，則反應(yīng)管沒(méi)有顏色變化，而葡萄球菌的管變?yōu)榻瘘S色。
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2、八疊球菌屬：屬于消化球菌科，細(xì)胞球形，呈八個(gè)或更多細(xì)胞的立方堆狀?？尚纬裳挎撸锾m陽(yáng)性?？砂l(fā)酵葡萄糖，產(chǎn)酸，專(zhuān)性厭氧，在pH1到9.8均可生長(zhǎng)。無(wú)接觸酶。鏡下應(yīng)不難辨認(rèn)。
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? ? ? ? 對(duì)于產(chǎn)堿桿菌，它與產(chǎn)堿假單胞菌非常近似，它的鑒別特征是在含有蛋白胨的肉湯培養(yǎng)基中產(chǎn)氨，使pH上升。糞產(chǎn)堿桿菌最常見(jiàn)，它在碳水化合物培養(yǎng)基上呈強(qiáng)烈的產(chǎn)堿反應(yīng)。木糖氧化產(chǎn)堿桿菌使OF葡萄糖培養(yǎng)基和OF木糖培養(yǎng)基產(chǎn)酸。本菌能還原亞硝酸鹽，而不能還原硝酸鹽。因而，采用OF基礎(chǔ)培養(yǎng)基（英文名：OF Basal HiVegTM Medium，貨號(hào)MV395）和相應(yīng)的糖溶液可鑒別產(chǎn)堿桿菌。
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? ? ? ? 對(duì)于棒狀桿菌，它屬于革蘭氏陽(yáng)性大桿菌，接觸酶陽(yáng)性。可采用碲酸鹽血瓊脂平板進(jìn)行分離培養(yǎng)，棒狀桿菌菌落呈灰黑色。
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? ? ? ?對(duì)于甲基桿菌，可采用PCR 法擴(kuò)增菌株的16S rDNA 和甲醇脫氫酶大亞基的 mxaF 基因，擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中用BLAST 進(jìn)行比對(duì)，并用MEGA4.0軟件進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析。甲基桿菌為革蘭陰性，氧化酶和接觸酶陽(yáng)性。
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? ? ? ? 對(duì)于梭菌，大部分為嚴(yán)格厭氧菌。在《伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)》中給出了一個(gè)表，主要根據(jù)糖發(fā)酵來(lái)鑒定梭菌屬內(nèi)的各個(gè)菌種。HiMedia公司提供了一種包含35種糖發(fā)酵的試劑盒（貨號(hào)KB009），因而可用于梭菌的鑒定。
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? ? ? ? 對(duì)于真菌，如親脂性酵母和霉菌（枝孢屬、青霉屬、曲霉屬），首先從形態(tài)上可區(qū)分細(xì)菌，也可區(qū)分酵母和霉菌，霉菌常常有絲狀菌絲。不同霉菌，有些從形態(tài)上也可區(qū)分。青霉菌屬帚狀枝是根據(jù)青霉菌屬特征性結(jié)果，根據(jù)菌落特征、分生孢子梗、帚狀枝、瓶梗和分生孢子形態(tài)特征，就可鑒定到屬甚至種水平。曲霉具有有隔菌絲、分生孢子梗和特殊的分生孢子頭結(jié)構(gòu)，易與其他菌屬真菌區(qū)別。還可根據(jù)SDA或PDA平板上生長(zhǎng)的快慢、菌落形態(tài)、分生孢子梗等進(jìn)一步鑒別。HiMedia也提供了一款鑒別培養(yǎng)基，貨號(hào)M1127，可區(qū)分巴西曲霉、黃曲霉和寄生曲霉。
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? ? ? ? 總之，對(duì)于制藥企業(yè)潔凈室的常見(jiàn)菌，通過(guò)形態(tài)染色、生化鑒定（可采用市面上提供的生化鑒定試劑盒）、PCR產(chǎn)物測(cè)序等手段，已足以滿足鑒定的需求，從而完成溯源和診斷的任務(wù)。
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